黃曲霉毒素親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋,然后緩慢的通過(guò)黃曲霉毒素B1免疫親和柱,在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素B1,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
黃曲霉毒素親和柱的用途
免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的黃曲霉毒素,從而對(duì)樣品起到非常針對(duì)性的凈化作用,過(guò)柱凈化后的樣品液可直接用于 HPLC 分析或處理后用熒光光度計(jì)檢測(cè)。
親和柱與 HPLC 或熒光光度計(jì)配合使用可達(dá)到快速測(cè)定的目的,以改善信噪比,可提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度。
黃曲霉毒素親和柱的使用注意事項(xiàng)
● 使用前,免疫親和柱需回至室溫(22~25℃)。
● 親和柱2~8℃儲(chǔ)存,不得凍存。
● 不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。
● 取樣量:根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量,注意提取液量要相應(yīng)改變。
● 柱容量:300ng,當(dāng)樣本中待檢毒素的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時(shí),需要適當(dāng)降低上樣液的體積,重新檢測(cè)。
● PH:親和柱的上樣溶液pH需在6~8之間,若偏離此范圍需要用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。
● 上機(jī)檢測(cè)時(shí)的溶劑與流動(dòng)相保持一致可以消除溶劑效應(yīng)的影響。
● 黃曲霉毒素B1可致癌,應(yīng)戴手套口罩等防護(hù)工具操作。
● 使用過(guò)的容器及黃曲霉毒素B1溶液用次氯酸鈉溶液(5%V/V)浸泡過(guò)夜。